檢驗標本的采集 

一、血液標本的采集 
血液標本可來自于靜脈、動脈或毛細血管。靜脈血是最常用的標本，靜脈穿刺是最常用的采血方法。毛細血管采血主要用于兒童，血氣分析多使用動脈血。 
（一） 靜脈采血法 
1 ．采血步驟 
采血前核對病人姓名、性別、年齡、編號及檢驗項目等，按試驗項目要求，準備好相應的容器，如空白試管、抗凝管或促凝管等。病人應取坐位或臥位，采血部位通常是前臂肘窩的正中靜脈。若用普通采血法，采血后應取下針頭，將血液沿管壁緩慢注入試管內(nèi)。 
2 ．注意事項 
（ 1 ） 防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清潔；淤血時間過長；穿刺不順利，組織損傷過多；抽血速度太快；血液注入容器時未取下針頭或注入速度過快產(chǎn)生大量泡沫；震蕩過于劇烈等。若用普通注射器采血后，未取針頭直接將血注入真空管內(nèi)，也易造成溶血。體內(nèi)溶血屬合格標本，但應在報告單上注明。 
（ 2 ） 避免充血和血液濃縮：采血時應動作迅速，盡可能縮短止血帶使用時間。用止血帶壓迫時間最好不超過半分鐘，否則將使生化結(jié)果升高或下降。 
（ 3 ） 若病人正在進行靜脈輸液，不宜在輸液同側(cè)手臂采血；若女性病人做了乳腺切除術(shù)，應在手術(shù)對側(cè)手臂采血。 
（ 4 ） 采血的體位：體位改變可引起一系列的生理變化，使血液中的許多指標發(fā)生改變。一般采取直立位采血，其測定值比臥位高 5 ％～ 15 ％。因此，采血時要注意保持正確的體位（坐位或臥位），以及體位的一致性。 
（ 5 ） 采血時只能向外抽，決不能向靜脈內(nèi)推，以免注入空氣，形成氣栓而造成嚴重后果。 
（ 6 ） 很多生化成分受膳食影響，因此，采血前要確認病人是否空腹。 
（二） 動脈采血法 
肱動脈、股動脈、橈動脈以及其它任何部位的動脈都可以作為采血點，但多選擇肱動脈和橈動脈。在摸到明顯搏動處，按常規(guī)消毒，左手固定搏動處，右手持注射器，針頭成 60 °角刺入，血液將自動進入注射器內(nèi)。采血注意事項見血氣分析部分。
 
（三） 真空采血法 
雙向針的一端在持針器的幫助下刺入靜脈，另一端插入真空試管內(nèi)，血液在負壓作用下自動流入試管內(nèi)。由于在完全封閉狀態(tài)下采血，避免了血液外溢引起的污染，并有利于標本的轉(zhuǎn)運和保存。標準真空采血管采用國際通用的頭蓋和標簽顏色顯示采血管內(nèi)添加劑種類和試驗用途?？筛鶕?jù)需要選擇相應的盛血試管。 
1．惰性分離膠促凝管 
紅色頭蓋，采血管內(nèi)添加有惰性分離膠和促凝劑，可激活纖維蛋白酶，使可溶性纖維蛋白變?yōu)椴豢扇艿睦w維蛋白多聚體，進而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊。標本離心后，惰性分離膠能夠?qū)⒀褐械囊后w成分（血清或血漿） 和固體成分（紅細胞、白細胞、血小板、纖維蛋白等） 徹底分開并完全積聚在試管中央而形成屏障，標本在 48 小時內(nèi)保持穩(wěn)定。促凝劑可快速激活凝血機制，加速凝血過程，常規(guī)用于血清生化、急診血清生化和血清學相關(guān)檢驗。
2 ．肝素鋰抗凝管 
綠色頭蓋，采血管內(nèi)添加有肝素鋰。肝素直接具有抗凝血酶的作用，可延長標本凝血時間。適用于血粘度、紅細胞脆性試驗、血氣分析、紅細胞壓積試驗、血沉及普通生化測定，不適于做血凝試驗。過量的肝素會引起白細胞的聚集，不能用于白細胞計數(shù)。因其可使血片染色后背景呈淡藍色，故也不適于白細胞分類。 
3  E DT A 抗凝管 
紫色頭蓋，乙二胺四乙酸（ E DT A ，分子量 292 ） 及其鹽是一種氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液標本中的鈣離子。螯合鈣或?qū)⑩}從反應位點移去會阻滯和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程，從而防止血液標本凝固。適用于一般血液學檢驗，不適用于凝血試驗及血小板功能檢查，亦不適用于鈣離子、鉀離子、鈉離子、鐵離子、堿性磷酸酶、肌酸激酶和亮氨酸氨基肽酶的測定及 PCR 試驗。 
4 ．枸櫞酸鈉凝血試驗管 
淺藍頭蓋，枸櫞酸鈉主要通過與血樣中鈣離子螯合而起抗凝作用。適用于凝血實驗，抗凝劑與血液的比例是 1 ∶ 9 。 
5 ．枸櫞酸鈉血沉試驗管 
黑色頭蓋，血沉試驗要求的枸櫞酸鈉濃度是 3．2 ％ （相當于 0．109 mol／L），抗凝劑與血液的比例為 1∶4 。
6   交叉配血管 
粉紅色頭蓋，乙二胺四乙酸二鉀是一種氨基多羧基酸，可以有效地螯合血液標本中的鈣離子。阻滯和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程，從而防止血液標本凝固。適用于血型和血交叉配血檢驗。
 
二、尿液標本的采集 
（一） 采集方法 
尿液標本有隨機新鮮尿、定時尿及 24 小時尿，根據(jù)檢查項目選擇標本的采集類型。定量生化分析多收集 24 小時尿液， 24 小時尿標本采集方法如下： 
囑病人在早晨 8 時排尿棄去，以后每次排尿均收集于一大容器內(nèi)，至次日早晨 8 時最后一次尿亦收集于容器內(nèi)。測量并記錄 24 小時尿液總量，然后混勻尿液，取適量尿液送檢。 
（二） 注意事項 
收集尿液標本的容器必須清潔干燥， 最好是一次性使用的容器。若容器反復使用，則須用洗滌液和自來水清洗， 再用蒸餾水沖洗。尿標本要防止混入月經(jīng)血、陰道分泌物、精液、前列腺液、糞便等異物。尿標本收集后應 12 時內(nèi)送檢，以免細菌作用和化學成分分解。若不能及時檢驗（如收集 24 小時尿液），將標本置冰箱保存，若加入防腐劑，保存效果更佳。 
三、糞便標本采集 
標本的收集、存放與運送的得當與否，直接關(guān)系到檢驗結(jié)果的準確性。 
應采取新鮮糞便，盛于潔凈、干燥無吸水性的有蓋容器內(nèi)，不得混有尿液、水或其他物質(zhì)，以免破壞有形成分，使病原菌死亡。污染腐生性原蟲、真菌孢子、植物種子、花粉易混淆檢驗結(jié)果。采集標本時應用干凈竹簽選取含有粘液、膿血等病變成分的糞便；外觀無異常的糞便須從表面、深處及糞端多處取材，其量至少為大拇指末段大?。s 5g ）。 
標本采集后一般情況應于 1h 內(nèi)檢查完畢，否則可因 p H 及消化酶等影響導致有形成分破壞分解。查痢疾阿米巴滋養(yǎng)體時應于排便后立即送檢。從膿血和稀軟部分取材，寒冷季節(jié)標本傳送及檢查時均需保溫。檢查日本血吸蟲卵時應取粘液、膿血部分，孵化毛蚴時至少留取 30g 糞便，且須盡快處理。檢查蟯蟲卵須用透明薄膜拭子于晚 12 時或清晨排便前自肛門周圍皺襞處拭取并立即鏡檢。找寄生蟲蟲體及做蟲卵計數(shù)時應采集 24h 糞便，前者應從全部糞便中仔細搜查或過篩，然后鑒別其種屬；后者應混勻后檢查。對某些寄生蟲及蟲卵的初步篩選檢驗，應采取三送三檢。因為許多腸道原蟲和某些蠕蟲卵都有周期性排出現(xiàn)象。 
隱血試驗，應連續(xù)檢查 3 天，選取外表及內(nèi)層糞便，應迅速進行檢查，以免因長時間放置使隱血反應的敏感度降低。 
糞膽原定量檢查應連續(xù)收集 3 天的糞便，每天將糞便混勻稱重后取出約 20g 送檢。查膽汁成分的糞便標本不應在室溫中長時間放置，以免陽性率減低。 
細菌檢驗用標本應全部用無菌操作收集，立即送檢。無糞便排出而又必須檢查時，可經(jīng)肛門指診或采便管拭取標本，灌腸或服油類瀉劑的糞便常因過稀且混有油滴等而不適于做檢查標本。 
四、分泌物的標本采集 
1. 取材所用消毒的刮板，吸管或棉拭子必須清潔干燥，不粘有任何化學藥品或潤滑劑。 
2. 根據(jù)不同的檢查目的可自不同部位取材。一般采用鹽水浸濕的棉拭子自陰道深部或陰道后部、宮頸管口、尿道等處取材，制備成生理鹽水液。 
五、特殊標本的采集 
（一） 腦脊液的采集 
正常腦脊液為無色、清亮水樣液體，當腦組織和腦膜有病變，如感染、外傷或腫瘤時，可使腦脊液（ cerebrospinal fluid ， CSF ） 發(fā)生變化，主要反映在顏色、透明度、細胞及各種化學成分的改變。腦脊液標本的采集由醫(yī)生進行。腦脊液的穿刺部位較多，有腰椎穿刺、小腦延髓池穿刺，嬰兒時期的前囟門作側(cè)腦室穿刺等。因腰椎穿刺簡單易行且危險性小， 最為常用。將腦脊液標本收集于三支無菌試管中，第 1 管作細菌檢查，第 2 管作生化檢查，第 3 管作細胞計數(shù)。腦脊液標本應盡量避免凝固和混入血液，標本采集后要立即送檢，以免因標本放置時間過長使其成分變化，如葡萄糖分解，使葡萄糖含量降低。 
（二） 漿膜腔積液的采集 
正常情況下，人體胸腔、腹腔、心包膜等有少量液體，它們主要起著潤滑漿膜的作用，當漿膜發(fā)生病變時，如炎癥、循環(huán)障礙、惡性腫瘤浸潤等，漿膜腔液產(chǎn)生增多并積聚在漿膜腔內(nèi)，稱為漿膜腔積液。檢測漿膜腔積液的某些化學成分，如蛋白質(zhì)、葡萄糖、酶及腫瘤標志物等，有助于了解漿膜腔積液的性質(zhì)和病因。一般由臨床醫(yī)生用漿膜腔穿刺術(shù)獲得標本。 
六、臨床微生物學檢驗標本的采集 
所有臨床微生物學檢驗標本的采集均應盡可能在使用抗生素使用之前進行！
※膿液及創(chuàng)傷感染標本的采集 
1 ．首先用無菌生理鹽水拭凈病灶表面的污染雜菌。 
2 ．對已破潰膿腫一般以無菌棉拭子采取膿液及病灶深部的分泌物， 而瘺管則以無菌方法采取組織碎片，放入無菌試管中送檢。 
3 ．對未破潰膿腫最好用 2．5 ％～3 ％碘酊和 75 ％ 酒精消毒患部皮膚后，以無菌注射器抽取膿汁及分泌物，也可于切開排膿時，以無菌棉拭采取。 
4 ．有時也可將沾有膿汁的最內(nèi)層敷料放入無菌平皿內(nèi)送檢。 
5 ．對放線菌的標本， 常用無菌棉拭擠壓瘺管，選取流出膿汁中的“硫磺樣顆粒”盛于試管內(nèi)送檢，也可將滅菌紗布塞入瘺管內(nèi)。次日取出送檢。 
※血液及骨髓標本的采集 
1 ．將患者擬采血部位放平，扎以止血帶，選好靜脈穿刺點，以皮點為中心用 2 ．5 ％～ 3 ％碘酊從內(nèi)向外周擦拭，待干后再以同法用 75 ％乙醇脫碘。消毒范圍不得過小。 
2 ．以無菌手續(xù)由靜脈取血 5 ml ，立即注入適當?shù)囊后w增菌培養(yǎng)基內(nèi)， 迅速輕搖，使充分混合，以防止凝固。 
※尿液標本的采集 
采集尿標本必須防止雜菌污染，嚴格無菌操作，一般多采集中段尿。送檢標本以晨起第一次尿液為佳，采集后立即送檢，（泌尿系感染大多病原菌，于室溫放置時間較久，即可增殖）。
1 ．中段尿采集方法 
（ 1 ） 女性采樣前應先用肥皂水清洗，再用 0．1％高錳酸鉀水溶液沖洗尿道口，然后排尿棄去前段尿，留取中段尿 10 ml 左右于無菌容器內(nèi)，立即送檢。 
（ 2 ） 男性須將包皮翻開沖洗，然后采集中段尿。 
（ 3 ） 兒童多數(shù)情況下僅沖洗外陰是不夠的，故采集標本較為困難，如尿內(nèi)細菌明顯增多，可高度懷疑尿路感染。 
2 ．腎盂尿采集法 
為確定菌尿是否來自腎臟，可用導尿管采集腎盂尿，充分沖洗膀胱，以最后一次沖洗尿作為對照，爾后用導尿管插入輸尿管，分別標記左右兩側(cè)收集 3 次尿，如輸尿管菌數(shù)比對照尿菌數(shù)多或第 3 次比第 1 次多，該菌尿可能來自腎臟；反之，第 1 次尿菌數(shù)多于第 3 次尿菌數(shù)，則可能來自膀胱。該方法一般請泌尿科醫(yī)師協(xié)助進行。 
3 ．膀胱穿刺采集法 
采集中段尿完全避免污染是很困難的培養(yǎng)結(jié)果與病情不符時，可采用恥骨上膀胱穿刺采集尿液。此法用于厭氧菌培養(yǎng)或留尿困難嬰幼兒。 
4 ．導尿法 
采取導尿管留尿是一種較好的無菌采集方法，取 10 ～ 15 ml 于滅菌容器內(nèi)送檢。 
※糞便標本的采集 
1 ．選取有膿血、粘液部分的糞便 2 ～ 3g ，液體糞便則取絮狀物，裝于滅菌的蠟紙盒中送檢。 
2 ．在無法獲得糞便的情況下，可用直腸拭子插入肛門 4 ～ 5cm 處，取直腸表面的粘液，裝于無菌試管或保存液中送檢。 
※上呼吸道標本的采集 
1 ．擬檢查白喉棒狀桿菌采集標本時， 應使患者對光而坐，頭部上仰口張大， 用壓舌板輕輕壓舌根，直接用棉拭子擦拭病人咽、鼻粘膜、偽膜邊緣部分或組織深層的分泌物作直接涂片和分離培養(yǎng)。若無局部病變或作帶菌者檢查則應于咽部或扁桃體上擦拭。 
2 ．擬檢查百日咳鮑特菌或腦膜炎奈瑟菌時，應自鼻咽部采集標本。即用無菌的鼻咽拭子（一端彎曲的金屬棉拭） 由口腔進入伸向鼻咽部，到達咽后壁涂擦取標本，對患百日咳患兒作標本培養(yǎng)時可采用咳碟法。 
3 ．擬檢查麻風分枝桿菌時， 可采取鼻粘膜標本。即將無菌棉拭子用力擦拭鼻中隔部，直至微有出血為止。 
※痰液及下呼吸道分泌物標本的采集 
1 ．標本在采集前，首先讓病人用清水漱口數(shù)次，以除去口腔內(nèi)大量雜菌，讓患者用力自氣管深部咳出痰液吐至無菌的廣口瓶內(nèi)或小紙盒內(nèi)。 
2 ．若病人痰量較少，需要檢查痰中結(jié)核桿菌時，則應收集 24 小時痰液。 
3 ．氣管洗滌液：取 8 ～ 9 號消毒導管，從鼻腔插入氣管內(nèi)， 緩慢注入滅菌蒸餾水 5 ml ，取出導管。留取病人在 3 小時內(nèi)咳出的痰液，放入滅菌瓶內(nèi)送檢，本法可在清晨空腹時進行。 
※鼻、咽、眼、耳拭子標本采集 
1 ．擬檢查白喉桿菌采集標本時， 應使患者對光而坐，頭部上仰口張大，用壓舌板輕輕壓舌根，直接用棉拭子擦拭病人咽、鼻粘膜、偽膜邊緣部分或組織深層的分泌物作直接涂片和分離培養(yǎng)。若無局部病變或作帶菌者檢查則應于咽部或扁桃體上擦拭。 
2 ．擬檢查百日咳桿菌或腦膜炎奈瑟菌時，應自鼻咽部采集標本。即用無菌的鼻咽拭子（一端彎曲的金屬棉拭）由口腔進入伸向鼻咽部，到達咽后壁涂擦取標本，對患百日咳患兒作標本培養(yǎng)時可采用咳碟法。
3 ．眼、耳道癤腫或化膿性疾病通常以無菌棉拭子直接采取分泌物送檢即可。

標本的處理
標本處理不當將可能引起比分析更大的誤差。因此，應根據(jù)分析目的選擇合適的抗凝劑、防腐劑和處理方法。
一、抗凝劑 
應用物理或化學方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固， 稱為抗凝。阻止血液凝固的化學試劑稱為抗凝劑。對抗凝劑的一般要求是用量少、溶解度大、不影響測定。生化檢驗常用的抗凝劑有以下幾種： 
1 ．肝素 
是一種含有硫酸基團的粘多糖，其抗凝機理主要是對抗凝血活酶和凝血酶的形成和活性，阻止血小板聚集。肝素抗凝血常用于血氣分析和部分生化項目的測定， 使用 1．0g／L的肝素溶液 0．5 ml 可抗凝 5 ml 血液。 
2 ．草酸鉀－氟化鈉 
草酸鉀可與血中鈣離子生成草酸鈣沉淀，從而阻止血液凝固。草酸鉀溶解度大，抗凝作用強。氟離子能結(jié)合鈣而抗凝，但抗凝效果較弱。氟離子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，防止糖酵解，若未加氟化鈉，血標本中葡萄糖含量將以每小時 6 ％的速度下降。而在氟化鈉的存在下，血糖濃度在 25 ℃ 可穩(wěn)定 24 小時， 4 ℃ 可穩(wěn)定 48 小時。因此，草酸鉀－氟化鈉是血糖測定標本常使用的抗凝劑。 
二、防腐劑 
尿液檢驗最好留取新鮮標本及時檢查，否則尿液生長細菌，使尿液中的化學成分發(fā)生變化。在留取 24 小時或 12 小時尿液時，尿液標本應置冰箱保存或加入防腐劑（ antiseptic ），常用的防腐劑有： 
1 ．濃鹽酸 
鹽酸使尿液保持酸性，阻止細菌繁殖， 同時防止一些化學物質(zhì)因尿液堿化而分解，通常用量為 0．5～1．0 ml 濃鹽酸／100 ml尿液，適用于 24 小時尿兒茶酚胺、秀草扁桃酸（V M A）、17－羥皮質(zhì)類固醇和17－酮類固醇等定量測定。
2 ．甲苯 
甲苯可在尿液表面形成薄膜，防止細菌繁殖，用量 1．0 ～ 2．0 ml 甲苯／100 ml 尿液，適用于尿肌酐、尿糖、蛋白質(zhì)、丙酮等生化項目的測定。 
3 ．冰醋酸 
用量5～10 ml 冰醋酸／24 小時尿液，適用于 24 小時尿醛固酮測定。