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痰細(xì)菌培養(yǎng)的臨床應(yīng)用

2020/6/2 11:42:56

摘要:世界范圍內(nèi)抗生素的使用比較混亂,細(xì)菌的耐藥日趨嚴(yán)重,合理針對性的使用抗生素成為必然,因此必須了解細(xì)菌類型和其藥敏情況。痰細(xì)菌檢查的診斷價值是人們一直關(guān)注的問題,為了快速而準(zhǔn)確的獲取痰的細(xì)菌情況,國內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了不斷的探索,本文就此進(jìn)行綜述,以利于獲取合格的痰標(biāo)本和快速而準(zhǔn)確的細(xì)菌學(xué)證據(jù)。





關(guān)鍵詞:痰  細(xì)菌培養(yǎng)
    自從1940年發(fā)現(xiàn)青霉素以來,人類就在不斷地開發(fā)新的藥物以治療細(xì)菌感染。尤其近20余年來,頭孢菌素和新的氟喹諾酮類及大環(huán)內(nèi)酯藥物的出現(xiàn),為臨床醫(yī)師應(yīng)用抗生素提供了許多選擇,大大地提高了感染患者的治愈率,同時也選擇出了許多的耐藥菌株。正是因為抗生素的多樣化和臨床選擇抗生素的隨機(jī)性,人們對于抗生素存在著濫用的情況,尤其在急診科,存在流水作業(yè),不同的醫(yī)生對同一個病人會選擇不同的抗生素,這同時也選擇了細(xì)菌,導(dǎo)致了細(xì)菌的耐藥率的逐年上升。在歐洲,80%以上的下呼吸道感染應(yīng)用抗生素治療,大多數(shù)醫(yī)生對急性支氣管炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、社區(qū)獲得性肺炎、和病毒性呼吸道感染不加以鑒別就應(yīng)用抗生素,不同的國家抗生素的選擇不一樣。據(jù)美國1994-1995年30個醫(yī)療中心的統(tǒng)計顯示:約24%的肺炎鏈球菌對青霉素不敏感,14%為中度耐藥,10%為高度耐藥。非典型流感嗜血桿菌的耐藥已高達(dá)36.4%,而在80年代僅為15%。有一374例下呼吸道感染的患者的前瞻性研究表明:耐藥肺炎鏈球菌感染同先前應(yīng)用β—內(nèi)酰胺類抗生素有關(guān)。因此合理使用抗生素成為防止細(xì)菌耐藥的一大重要策略。要合理的使用抗生素,除了加強(qiáng)規(guī)范化的經(jīng)驗性治療外,最重要的是明確感染患者的病原菌及其藥敏情況,以便針對性的使用抗生素。因此快速而準(zhǔn)確的細(xì)菌培養(yǎng)是急需解決的問題。
   下呼吸道感染是指聲門以下的呼吸道的感染。包括社會獲得性和醫(yī)院內(nèi)獲得性,在臨床上極為常見,其病原菌種類繁多,院內(nèi)感染者多以革蘭氏陰性桿菌多見,混合感染也較多。臨床表現(xiàn)也多種多樣,通過胸片和癥狀體征難以鑒別感染的細(xì)菌類型,因此病原學(xué)檢查非常重要。準(zhǔn)確獲取病原學(xué)證據(jù)有利于及早明確診斷,根據(jù)藥敏及時地進(jìn)行抗菌治療。獲取病原菌的方法多種多樣,如血培養(yǎng),痰涂片和痰培養(yǎng)及經(jīng)氣管吸引術(shù)采痰、纖支鏡保護(hù)性毛刷及肺泡灌洗和肺活檢等。血培養(yǎng)陽性率低,其臨床應(yīng)用價值有限,而經(jīng)氣管吸引術(shù)采痰、纖支鏡保護(hù)性毛刷及肺泡灌洗和肺活檢均為有創(chuàng)檢查,一般患者難以接受,限制了其在臨床中的廣泛使用。而痰為下呼吸道的分泌物,其病原菌的情況最能真實的反應(yīng)下呼吸道的感染情況,因此痰涂片鏡檢和痰培養(yǎng)一直受到臨床上的關(guān)注,且常規(guī)用以指導(dǎo)臨床治療。對此國內(nèi)外學(xué)者為快速而準(zhǔn)確的獲取病原學(xué)證據(jù)作了大量的工作,本文就此進(jìn)行綜述,以利于獲取合格的痰標(biāo)本和快速而準(zhǔn)確的細(xì)菌學(xué)證據(jù)。
一、痰細(xì)菌培養(yǎng)存在的問題
    細(xì)菌培養(yǎng)的過程包括臨床痰標(biāo)本的流取和試驗室的接種培養(yǎng)及鑒定,二者均直接影響細(xì)菌培養(yǎng)的結(jié)果,必需同時加以改進(jìn),才能提高培養(yǎng)的準(zhǔn)確性。幾十年來,對于痰標(biāo)本的臨床價值一直存在著爭議,其原因主要有:(1)、大多數(shù)的下呼吸道感染患者有咳嗽咳痰的癥狀,但咳痰量因人而異,臨床上約有10-30%的患者干咳無痰或咳痰無力,通過自主咳嗽無法獲取痰標(biāo)本;(2)、人體口咽部寄居有大量的正常菌群,尤其是長期住院患者,口腔中的革蘭氏陰性桿菌的數(shù)量明顯增多,咳出的痰液在口腔中停留易被污染,從而影響檢查結(jié)果;(3)、約15-30%的患者在痰標(biāo)本留取前已經(jīng)使用過多種抗生素,一些比較脆弱的細(xì)菌如肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌在應(yīng)用抗生素后,取任何呼吸道的標(biāo)本的檢出率為0,實際上檢出的細(xì)菌很大程度上是對所應(yīng)用的抗生素耐藥的細(xì)菌,從而使藥敏結(jié)果對臨床用藥的指導(dǎo)意義大大降低;(4)、目前絕大多數(shù)的醫(yī)院采用的培養(yǎng)基為2種,即血平板和伊紅—美蘭平板,使得許多導(dǎo)致呼吸道感染的病原菌不能被分離出來。流感嗜血桿菌是慢性阻塞性肺疾病急性發(fā)作期第1位常見的致病菌,其培養(yǎng)需要巧克力培養(yǎng)基和CO2培養(yǎng)箱,但一般試驗室都不進(jìn)行該培養(yǎng)基的培養(yǎng),從而使得許多常規(guī)培養(yǎng)為陰性,這樣痰培養(yǎng)對指導(dǎo)臨床用藥的幫助大大降低。(5)、對于常規(guī)痰培養(yǎng)而言,試驗室多采用白金耳環(huán)取痰中極少一部分在培養(yǎng)基中劃線培養(yǎng)由于痰中細(xì)菌的數(shù)量和種類的分布不均勻,接種時可能所取的部位沒有致病菌或只接種了一部分致病菌,這使培養(yǎng)的陽性率大大降低。盡管如此,痰液畢竟是下呼吸道的分泌物,其病原菌情況最能真實地反應(yīng)感染的細(xì)菌,因此提高痰培養(yǎng)的準(zhǔn)確性是臨床醫(yī)生和細(xì)菌學(xué)工作者極其關(guān)注的問題,并對此作了許多改進(jìn),從而更有效地指導(dǎo)臨床用藥。
 
 二、痰細(xì)菌培養(yǎng)的改進(jìn)措施
痰誘導(dǎo)的方法現(xiàn)已成功地應(yīng)用于研究哮喘的氣道炎癥,其誘導(dǎo)成功率約為76-100%,這是一種簡單、安全的獲取下呼吸道痰液的方法。近年來有人建議應(yīng)用此方法對干咳無痰的患者進(jìn)行誘導(dǎo),然后進(jìn)行痰培養(yǎng),這使得痰培養(yǎng)的應(yīng)用范圍擴(kuò)大了,但有的患者基礎(chǔ)肺功能差,根本不能耐受誘導(dǎo)或誘導(dǎo)后患者病情加重,在一定程度上限制了其應(yīng)用。為了消除口腔寄生菌的污染,有人應(yīng)用0.1%的洗必泰或0.1%的新潔爾滅或H2O2漱口然后留痰,結(jié)果能明顯減低污染率。同時對咳出的痰液用0.9%的鹽水洗痰3-4次,然后應(yīng)用痰液消化液如1.8%的NH4CL或N-乙酰半胱氨酸鈉進(jìn)行消化,使痰液均勻化,接種的陽性率大大的提高。口腔寄生或唾液中含有的雜菌濃度可高達(dá)106-9/ml,Bartlett將沖洗后的痰做細(xì)菌定量培養(yǎng),可降低標(biāo)本的污染平均濃度為103-4/ml,其陽性菌株與經(jīng)氣管所獲標(biāo)本結(jié)果一致。Dixon報告稀釋10000倍的痰培養(yǎng)結(jié)果并顯著降低致病菌的陽性發(fā)現(xiàn)率,但可降低因污染引起的假陽性率(可降低到21%)。作者曾應(yīng)用顯微鏡觀察漱口前后咳出的痰液和用0.9%的鹽水沖洗后的痰液,發(fā)現(xiàn)涂片中鱗狀上皮細(xì)胞明顯減少,這樣獲取的痰標(biāo)本90%以上能達(dá)到合格:鱗狀上皮細(xì)胞〈10個/低倍視野,白細(xì)胞〉25個/低倍視野。因此必需強(qiáng)調(diào)漱口和消化痰液的重要性。對于采取的痰液消化劑而言,必須具有消化痰液的能力,同時又不能抑制細(xì)菌的生長。許多人采用的1.8%的NH4CL或N-乙酰半胱氨酸鈉對大多數(shù)細(xì)菌無抑制作用,但對比較脆弱的細(xì)菌如肺炎鏈球菌的生長抑制比較明顯,這不利于準(zhǔn)確地進(jìn)行痰培養(yǎng),因此尋找合適的消化液是消化痰液必需解決的問題。培養(yǎng)基的選擇也是影響痰培養(yǎng)的很重要的原因,余國華等人設(shè)計了“全痰系列分離法”,應(yīng)用7種培養(yǎng)基對慢性阻塞性肺疾病患者的痰分離菌群和口腔分離菌群相對照,成功的評價了慢性阻塞性肺疾病患者急性加重期的致病菌情況,同時指出:只有痰細(xì)菌濃度較唾液同種細(xì)菌高100倍以上,方能確認(rèn)其在支氣管內(nèi)叢生。除了對常規(guī)留痰方法進(jìn)行改進(jìn)外,國內(nèi)外學(xué)者都在為獲得無污染的下呼吸道分泌物而努力。進(jìn)氣管吸引術(shù),可避免口腔正常菌群的污染,主要用于肺部厭氧菌的感染、免疫受損的患者和非典型肺炎的病原菌檢查,但其副作用大,患者不易接受,目前已很少應(yīng)用。侯顯明等人通過經(jīng)氣管穿刺吸引痰培養(yǎng)和經(jīng)口痰菌定量培養(yǎng)的比較,得出定量培養(yǎng)的判斷標(biāo)準(zhǔn):菌群>107cfu/ml可認(rèn)定為致病菌;菌群〈107cfu/ml,但>104cfu/ml且當(dāng)兩次培養(yǎng)結(jié)果相同時,也具有臨床意義;如菌群〈104cfu/ml其菌屬與對照吸引痰培養(yǎng)不一致時,提示為口腔菌群污染。纖支鏡的檢查不但可以目視三級以上支氣管的內(nèi)壁情況,同時也可以通過灌洗和保護(hù)性毛刷采樣而獲取下呼吸道分泌物進(jìn)行培養(yǎng),定量培養(yǎng)后,菌群>103cfu/ml可有臨床意義。目前保護(hù)性毛刷采樣進(jìn)行定量培養(yǎng)被認(rèn)為是痰細(xì)菌培養(yǎng)的“金標(biāo)準(zhǔn)”,其敏感性可達(dá)80%,特異性達(dá)90%。單套管和雙套管保護(hù)性毛刷采樣進(jìn)行培養(yǎng)其結(jié)果無顯著性差別。它最適合于沒有進(jìn)行抗生素治療和停用抗生素48小時以上的患者。但這些為有創(chuàng)檢查,一般患者難以接受,其臨床的廣泛應(yīng)用受限,但對于復(fù)雜肺炎的患者,明確病原菌的類型和藥敏情況具有重要作用。
對于特殊細(xì)菌如結(jié)核桿菌的檢查是人們比較關(guān)注的問題,其培養(yǎng)一般需要4-6周,很不利于指導(dǎo)臨床用藥,尤其近年來結(jié)核桿菌的耐藥問題日趨嚴(yán)重,臨床急需根據(jù)藥敏指導(dǎo)用藥,因此快速準(zhǔn)確地檢測結(jié)核桿菌及其藥敏情況是必須解決的問題。國內(nèi)外學(xué)者對此也進(jìn)行了大量的研究。應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)的方法快速檢測痰中的結(jié)核桿菌,Kolk AH等人的研究表明:對于所檢測出的35例結(jié)核患者臨床資料大都支持。對于無痰的患者可采取痰誘導(dǎo)的方法解決,并且對誘導(dǎo)痰進(jìn)行PCR對于診斷結(jié)核非常有用,PCR的結(jié)果和痰培養(yǎng)的結(jié)果互相補(bǔ)充。但是PCR的影響因素很多,其假陽性很高,目前國內(nèi)僅限于科研而少應(yīng)用于臨床診斷。
三、細(xì)菌鑒定的準(zhǔn)確性和速度提高
細(xì)菌的鑒定經(jīng)歷了由手工到自動的過程。傳統(tǒng)的分離與鑒定細(xì)菌的方法十分麻煩,并且都依賴于細(xì)菌的生長,現(xiàn)已有不依賴于細(xì)菌生長的鑒定技術(shù)和方法。目前已有細(xì)菌和藥敏的成套的鑒定系統(tǒng),如手工(Apc)鑒定系統(tǒng)、自動(ATB)鑒定系統(tǒng)和UTTEK—全自動微生物鑒定系統(tǒng),其鑒定速度快,準(zhǔn)確性提高,免除了繁瑣的手工操作,以往痰培養(yǎng)結(jié)果一般為7天,目前3-4天就可以出來,為及時準(zhǔn)確地指導(dǎo)臨床用藥提供了方便。Vitek—AMS自動鑒定系統(tǒng)是國內(nèi)全自動系統(tǒng)應(yīng)用最廣泛的一種,全世界也有4246家實驗室應(yīng)用該系統(tǒng),它既能進(jìn)行鑒定又能進(jìn)行藥敏實驗。美國最普遍使用的MicroScan系列可鑒定近500種細(xì)菌,鑒定速度快。ATB expression半自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)可鑒定770種細(xì)菌和分析近80種抗生素藥敏實驗,可進(jìn)行苛氧細(xì)菌、嗜血桿菌、奈瑟菌、厭氧菌、真菌和支原體的藥敏。15但傳統(tǒng)藥敏實驗的基本方法并無大的改變,如瓊脂培養(yǎng)基法包括瓊脂稀釋法、有限瓊脂稀釋法和濾紙片擴(kuò)散法,肉湯培養(yǎng)基法包括用于自動化測定的微量肉湯稀釋法和肉湯濾紙片稀釋法,均為目前大多實驗室采用的藥敏方法。有的細(xì)菌如肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌和金黃色葡萄球菌具有典型的形態(tài),在痰涂片時就能識別出來16,因此痰涂片也可以及時地明確部分典型細(xì)菌,(對于金黃色葡萄球菌希氏內(nèi)科學(xué)(第20版)未列為此類典型細(xì)菌)為指導(dǎo)經(jīng)驗性的臨床用藥提供幫助,正確使用抗生素,但其藥敏情況及是否混合其它病原菌感染有待于痰培養(yǎng)后明確,因此二者不可偏廢,彼此驗證,更正確而迅速地為臨床提供幫助。
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